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通道載玻片內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)介紹

本應(yīng)用簡報說明了如何在細(xì)胞培養(yǎng)微通道內(nèi)生長貼壁細(xì)胞鼻昼。將描述細(xì)胞接種兰粉，培養(yǎng)基交換和光學(xué)性質(zhì)研儒。另外，顯示了細(xì)胞培養(yǎng)通道和標(biāo)準(zhǔn)開放孔格式之間的主要差異谒兄。

為了顯示細(xì)胞接種和μ-Slide處理摔桦，使用μ-Slide VI 0.4進(jìn)行演示。像通常方法一樣制備細(xì)胞懸液（例如3×105細(xì)胞/ ml）并將30μl加到通道中承疲。將移液管尖端放在通道的入口上邻耕，并如圖所示指向通道⊙喔耄快速分配并填充整個渠道兄世。


細(xì)胞附著后，如上圖所示啊研，將60μl無細(xì)胞培養(yǎng)基填充到每個通道中御滩。注意避免氣泡。如果在細(xì)胞粘附后進(jìn)行填充步驟党远，則不會將細(xì)胞沖洗出通道削解。如果您想在細(xì)胞接種后立即填充通道，請小心移液蒸败。


μ-Slide VI 0.4在顯微鏡觀察時已充滿細(xì)胞和培養(yǎng)基圾恐。

填充μ-Slide VI 0.4的Luer儲液孔。

2.培養(yǎng)基交換
a.連續(xù)介質(zhì)交換 - 推薦使用
對于連續(xù)介質(zhì)更換雅沽，首先從儲存器中移除舊介質(zhì)擂椎。然后，將適量的新鮮培養(yǎng)基加入一個儲液器中蚜症，同時從另一個儲液孔中吸出融卿。小心使用細(xì)胞培養(yǎng)移液器峡黍。我們建議體積至少是通道容積的3倍。重新填充儲液器同嚷。

連續(xù)交換介質(zhì)體積為3倍的介質(zhì)羔峭。

b.完全的培養(yǎng)液交換 - 僅適用于昂貴的液體

如果僅僅更換通道內(nèi)液體，請先清空通道甫知。然后，將移液管尖端放在通道入口上愁霞，并小心地將液體從通道中吸出诡蜓。使用細(xì)胞培養(yǎng)移液器徹底清除所有液體。為了重新填充通道胰挑，將通道容量的新鮮介質(zhì)直接注入通道蔓罚。避免產(chǎn)生氣泡。重新填充兩邊的蓄液孔瞻颂。

完全清空通道可能導(dǎo)致重新填充后形成氣泡豺谈。

通道和儲存孔液體完全替換。


3.通道載玻片與多孔載玻片
在下面部分贡这，我們將μ-Slide VI 0.4（細(xì)胞培養(yǎng)通道）的特性與μ-Slide 8孔（開放格式）進(jìn)行比較茬末。

對于接種細(xì)胞，主要差異是結(jié)構(gòu)內(nèi)部液體的高度盖矫。兩個系統(tǒng)的小區(qū)域部分如下所示丽惭。μ-Slide VI 0.4通道內(nèi)部底部和頂部之間的距離為400μm。填充的μ-Slide 8孔載玻片沒有頂部結(jié)構(gòu)辈双。在8孔載玻片里面责掏，培養(yǎng)基約為0.3毫，通道載玻片比開放格式8孔載玻片薄7.5倍湃望。

對于細(xì)胞接種换衬，必須應(yīng)用不同的細(xì)胞密度以在表面上獲得相同量的細(xì)胞。在該示例中笼万，目標(biāo)是接種25個細(xì)胞/單位面積歪眨。由于μ-Slide 8孔內(nèi)液體的高度是7.5倍，因此應(yīng)用的細(xì)胞濃度必須低于相同的因子秤皿。


基于不同高度的液體內(nèi)部μ-Slide VI 0.4和μ-Slide 8孔基际。在上面的例子中，相同的生長區(qū)域和細(xì)胞數(shù)量但不同的體積導(dǎo)致所需的細(xì)胞濃度不同办溶。


為了獲得相當(dāng)程度的融合袍砚，我們建議使用3 ... 7 x 105細(xì)胞/ ml（μ-Slide VI 0.4）和4 ... 9 x 104細(xì)胞/ ml（μ-Slide 8孔）。這是兩個幾何形狀之間相同的~7.5倍抠阴。細(xì)胞粘附后槐伍，每單位面積的細(xì)胞數(shù)相同择绘。

由于不同的高度，不同的細(xì)胞濃度產(chǎn)生相同等級的細(xì)胞聚合凌红。

4.通道μ-Slide的優(yōu)點
與標(biāo)準(zhǔn)開孔格式相比混砸，通道載玻片具有很強的優(yōu)勢。

a.相差顯微成像效果更好
通道幾何結(jié)構(gòu)很方便使用相差顯微鏡硬纤，因為沒有凹液面的影響解滓，整個生長區(qū)域可以用相差技術(shù)觀察。

與開放式多孔載玻片不同筝家，通道載玻片不會干擾相差顯微鏡的光束路徑洼裤，從而獲得更好的相差效果。


開放式多孔培養(yǎng)板(圖a,圖b)：凹液面影響了了相差效果溪王。只有中心部位能提供高質(zhì)量的對比度腮鞍。

通道式載玻片(圖c,圖d)：在通道幾何結(jié)構(gòu)中，光束路徑始終對齊莹菱。整個視野都可以提供高質(zhì)量的相差顯微鏡成像移国。


b.細(xì)胞分布均勻

在通道中，因為邊緣效應(yīng)小道伟，貼壁細(xì)胞的同質(zhì)性要好得多迹缀。

下面的顯微圖像，相差（a）和熒光（b）模式中顯示了開放孔（1-3）中細(xì)胞分布的不均勻性和細(xì)胞培養(yǎng)通道（4-6）中的同質(zhì)性皱卓。


1     開放式多孔載玻片裹芝，邊緣位置成像
2     開放式多孔載玻片，隨機位置成像
3   開放式多孔載玻片娜汁，中心部分
4     通道載玻片臀匹，邊緣位置成像
5     通道載玻片，隨機位置成像
6   通道載玻片油后，中心位置成像